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1、手卫生：洗手或手消毒，最容易忽略，却也是很重要的一条；
2、准备血培养瓶：根据检验申请单，选择合适的血培养瓶，检查血培养瓶有无破损、保质期，用75%酒精消毒血培养瓶塞，作用60s，待干。在血液注入血培养瓶之前，用无菌纱布或棉签清除橡皮塞残留的酒精；
3、皮肤消毒：按常规消毒穿刺部位皮肤，使用消毒剂[碘酊或聚维酮碘(碘伏)]对皮肤进行严格仔细的消毒处理，消毒范围为8×10cm，待干，防止皮肤寄生菌或环境引起的污染。
4、持采血针按常规方法刺入静脉，另一头刺入相应血培养瓶内，利用瓶内真空抽取血标本，如用注射器无菌穿刺取血后,勿换针头直接注入血培养瓶。（使用采血针采血时应先采集需氧瓶后采集厌氧瓶，使用注射器采集标本时则反之）
5、建议每套血培养同时接种至需氧瓶和厌氧瓶，有利于微需氧菌和厌氧菌的检出。如果不能满足推荐的采血量时，应首先满足需氧瓶；婴幼儿血培养一般只抽一瓶需氧瓶进行培养，无需常规做厌氧瓶。
6、血液注入血培养瓶后轻摇瓶子以防血液凝固。
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