化学发光试剂的配置

发布日期：2018-12-29 作者：点击：

化学发光试剂的配置在使用前等量混合A液和B液，混合后尽快使用。将膜片置混合液中于室温下振荡温育2分钟，每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆盖全膜片。蛋白信号显现用平头镊钳住膜片，垂直置于吸水纸以吸去过量试剂。置膜片于二层保鲜膜之间，小心赶尽气泡。将膜片吸附蛋白面朝上，置于X光片盒中。于暗室中压上X光片。根据信号的强弱适当调整曝光时间，一般为1min或5min，也可选择不同时间多次压片，以达zui佳效果。显影冲洗。调节曝光时间，再次曝光显影。

化学发光试剂本试剂是非放射性发光系统，用于检测固定在膜上的蛋白，其敏感性达1-5pg。用X光片可快速地获得*的硬拷贝结果。所含独特的底物足以维持12小时以上的发光，便于反复曝光操作，免疫印迹膜经抗体脱卸处理后可供再次抗体探查使用。适用于痕量蛋白或核酸检测。

化学发光试剂原理：辣根过氧化酶使试剂中的发光物（Luminol）氧化并发光，而试剂中含有增强剂这使得发光增强了1000倍。在免疫印迹中，将复杂的蛋白混合物经SDS-PAGE分离，并转移到固相膜上（如NC、PVDF）等，用于免疫学检测，经HRP标记的抗体与膜上的蛋白直接（标记一抗）或间接（标记二抗）反应。当加入免疫印迹化学发光试剂后，Luminol发生氧化降解，并发射波长为428nm的光，此光可经X光胶片(放射自显影片)感光记录下来。